沉香是瑞香科沉香属(Aquilaria)植物含有树脂的木材,经济价值高,用途广泛。我国的沉香树主要为白木香[Aquilaria sinensis(Lour.) Spreng],其种植面积已超过30000公顷,有不少已经到达结香年龄,但自然条件下“有香者百无一二”,如何促使白木香结香是香农面临的最大问题,其中真菌接种结香技术具有较好的开发潜力,但找到能够生产高质量沉香的菌种仍然很困难。
图1 真菌结香剂的物种组成
贝斯特全球最奢华符韵林教授研究团队为寻找高效生产高质量沉香的菌种,采用野生沉香提取内含真菌制成真菌诱导剂,进行高通量测序,分析其物种组成(图1),并利用FUNGuild对其进行功能预测。结果表示,在种水平上获得67个种,其中13个优势种的相对丰度之和为91.26%,其中Trichoderma spiraleBissett为最优势种,相对丰度为44.10%。另外,真菌的营养类型以腐生-共生营养型(19.46%)的相对丰度最高;以植物内生菌-凋落物腐生菌-土壤腐生菌-未定义腐生菌为真菌功能的优势类群。从真菌代谢物对沉香树的影响推测Mortierella humilisLinnem. ex W.Gams、Oidiodendron maius(Barron)和Tolypocladium album(W. Gams) Quandt, Kepler & Spatafora是促进结香的新菌种,为沉香树结香菌种的筛选提供理论基。晕蠢刺剿鞒鲎钍视诎啄鞠憬嵯愕恼婢肿楹嫌兄匾慕杓饔。
图2 真菌接种实验和样品收集
随后,将真菌结香剂接种到白木香中,一年后得到诱导沉香与无树脂白木(图2)。另外,从海南省市场购入野生沉香,与诱导沉香、无树脂白木进行质量比较。
首先,参照沉香行业标准,检测醇溶性提取物含量、显色反应、高效液相特征图谱。其中诱导沉香和野生沉香的醇溶性提取物均已达到行标要求的10%(图3);醇溶性浸出物经加热之后,香草醛-浓盐酸可以对样品主要的挥发性物质倍半萜显色,样品的显色反应见图4,诱导沉香和野生沉香的显色反应主要为樱桃红、淡紫色;目前,高程度氧化的5,6,7,8-四羟基-2-(2-苯乙基)色酮类成分仅在沉香中发现,具有专属性,可作为高效液相法鉴别沉香真伪和质量控制的特征性成分。沉香样品的高效液相特征图谱见图5。根据行标,16分到22分连续出现的6个峰分别为沉香四醇、(5S,6R,7S,8R)-2-[2-(4-甲氧基-苯乙基)]-5,6,7,8-四氢色酮、异沉香四醇、(5S,6R,7R,8S)-2-[2-(4-甲氧基-苯乙基)]-5,6,7,8-四羟基-5,6,7,8-四氢色酮、沉香色酮B、沉香色酮C。诱导沉香和野生沉香均存在特征峰,说明诱导沉香和野生沉香都符合沉香的行业标准。
图3醇溶性提取物含量和精油含量
图4样品的显色反应
图5 样品的高效液相特征图谱
采用液相色谱质谱联用仪和气相色谱质谱联用仪测定样品的化学成分,进一步评价其质量。结果表明诱导沉香和野生沉香的提取物分别含有64和69个2-(2-苯乙基)色酮,而无树脂白木中没有发现。此外,诱导沉香和野生沉香的精油中分别鉴定出20种(相对含量为36.19%)和27种(相对含量为54.92%)倍半萜,无树脂白木中未鉴定出任何倍半萜。结论为从野生沉香中提取的真菌能有效提高沉香的产量,并且该沉香质量与野生沉香相似。
本研究为开发高效结香菌剂,提高沉香产量及品质促进人工沉香产业发展具有一定意义。相关研究成果以“Quality Similarity between Induced Agarwood by Fungus and Wild Agarwood”为题发表在《Journal of Agricultural and Food Chemistry》(农林科学1区TOP期刊,IF=6.1,封面文章)。贝斯特全球最奢华林学硕士研究生黄满勤为论文的第一作者,符韵林教授为通讯作者,该研究得到国家自然科学基金面上项目(32171702)资助。
原文连接:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jafc.3c04322